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  3. EXPERIMENT

    蛋白實驗檢測

    (一) WESTERN BLOTTING檢測

    蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)即Western Blot。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色, 再通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。

    METHOD

    實驗方法

    SHOW

    實驗結果展示

    INSTRUCTIONS

    實驗服務說明

    (二) ELISA檢測

    酶聯免疫吸附測定enzyme linked immunosorbent assay(簡寫ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上, 利用抗原抗體結合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。

    METHOD

    分類方法

    A、定性測定

    定性測定的結果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答,分別用"陽性"、"陰性"表示。 "陽性"表示該標本在該測定系統中有反應。"陰性"則為無反應。用定性判斷法也可得到半定量結果,即用滴度來表示反應的強度, 其實質仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中,將標本作一系列稀釋后進行試驗,呈陽性反應的最高稀釋度即為滴度。 根據滴度的高低,可以判斷標本反應性的強弱,這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。

    在間接法和夾心法ELISA中,陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法ELISA中則相反,陰性孔呈色深于陽性孔。

    B、定量測定

    ELISA操作步驟復雜,影響反應因素較多,特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致,因此在定量測定中,每批測試均須用 一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。測定大分子量物質的夾心法ELISA,標準曲線的范圍一般較寬, 曲線最高點的吸光度可接近2.0,繪制時常用半對數值,以檢測物的濃度為橫坐標,以吸光度為縱坐標,將各濃度的值逐點連接, 所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨于平坦,中央較呈直線的部分是最理想的檢測區域。測定小分子量物質常用競爭法, 其標準曲線中吸光度與受檢物質的濃度呈負相關。標準曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測定的標準曲線注意圖中 橫坐標為對數關系,這更有利于測定系統的表達。

    (三) TUNEL法檢測細胞凋亡

    細胞在發生凋亡時,會激活一些DNA內切酶,這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測, 可以發現180-200bp的DNA ladder?;蚪MDNA斷裂時,暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素?(FITC) 標記的dUTP (fluorescein-dUTP) ,從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測, 這就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法檢測細胞凋亡的原理。

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